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多酚类化合物是平庸存在于植物中的次级代谢居品，具有无边的抗氧化、抗虚弱、抗菌、抗癌、降血脂和提高机体免疫力等功能。单 宁又称单宁酸或鞣酸，是中高度团员的多酚类化合物，可分为水解单宁和缩和单宁，两者常共存于植物组织中。 水解单宁能被酸、碱和特定的酶水解,是由葡萄糖和没食子酸或鞣花酸造成的多元酯类化合物，包括没食子酸吡喃葡萄糖、没食子单宁、鞣花单宁及它们的繁衍物。覆盆子为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子（Rubus chingii Hu）的未熟练干燥果实，含有丰富单宁类化合物，约占总多酚的75%。但覆盆子单宁经胃肠谈消化后的幽静性、活性变化相等对肠谈菌群的更始作用尚不解确。

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江西师范大学人命科学学院贾晓燕、胡一又一又、张 露*等从覆盆子中提真金不怕火富集单宁，通过体外模拟消化模子探究覆盆子单宁富集组分消化前后单宁含量及抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶扼制活性变化，通过体外厌氧发酵模子分析模拟消化对其肠谈菌群更始作用的影响，终末选择超高效液相色谱-四极杆飞行时分串联质谱法（UPLC-ESI-QTOF-MS/MS）比较体外消化和酵解居品中单宁构成相等代谢居品含量变化情况。

1.模拟胃肠谈消化后覆盆子单宁富集组分水解单宁含量变化

覆盆子单宁组分经胃肠谈模拟消化后的可水解单宁含量变化如表1所示。覆盆子单宁经胃模拟消化后，FGE组和FG组的可水解单宁含量较FY组显赫加多（ P ＜0.05 ），区别加多了125.04%和103.73%，且两组间具有显赫性各异（P＜0.05）。 在胃消化经过中，消化酶和pH值环境均会影响样品中可水解单宁的幽静性，且pH值影响更大，水解单宁在酸性条目下会水解因素子质地较低的没食子单宁和鞣花单宁。 经肠谈模拟消化后，FIE组和FI组的可水解单宁含量较FGE、FG两组明显下跌，区别下跌了56.24%和66.24%（P＜0.05），标明在肠谈消化经过中，覆盆子中可水解单宁的幽静性同期受消化酶和pH值环境的影响，但受消化酶的影响较小。综上，覆盆子单宁经胃肠谈模拟消化后，其含量天然在胃消化阶段会显赫加多，但肠消化阶段却进展为显赫下跌，标明胃肠谈消化经过会影响可水解单宁的幽静性，使其含量减少。

2.模拟胃肠谈消化后覆盆子单宁富集组分DPPH摆脱基、ABTS阳离子摆脱基废除智力

覆盆子单宁及经胃肠谈模拟消化后样品的DPPH摆脱基、ABTS阳离子摆脱基废除智力如图2和表1所示。总计样品的DPPH摆脱基废除智力均跟着样品性量浓度的加多而增强，FY的DPPH摆脱基废除智力最弱（ IC 50 ＝63.57 µg/mL），FGE、FG、FIE和FI的DPPH摆脱基废除智力邻近，为FY组的1.60～2.18 倍，胃肠消化经过会显赫增强覆盆子单宁的DPPH摆脱基废除智力（P＜0.05）， I C 50 为 为29.15～39.65 µg/mL，可能是因为覆盆子单宁胃消化经过中含量高涨，导致其抗氧化活性增强。另外，总计样品均具有较好的ABTS阳离子摆脱基废除智力，且在质地浓度低于130 µg/mL时具有无边的剂量-效应关系，但原样与消化样品间的ABTS阳离子摆脱基废除智力无明显各异，IC 50 为26.49～31.22 µg/mL，标明胃肠谈模拟消化对覆盆子单宁的ABTS阳离子摆脱基废除智力无明显影响。

3.模拟胃肠谈消化后覆盆子单宁富集组分的α-葡萄糖苷酶扼制智力

覆盆子单宁相等胃肠谈模拟消化样品的α-葡萄糖苷酶扼制智力如图3和表1所示，FIE组（IC50＝77.66 µg/mL）和FI组（IC50＝85.18 µg/mL）的α-葡萄糖苷酶扼制智力较弱，而FY、FGE和FG则具有无边的α-葡萄糖苷酶扼制智力，IC50区别为10.84、6.38、5.83 µg/mL，经肠谈模拟消化后，样品的α-葡萄糖苷酶扼制智力明显裁减。以上服从标明，样品经胃模拟消化后，其扼制智力有所栽种（P＜0.05），pH值的影响大于消化酶，这可能是由于在胃消化阶段，pH值环境发生转变，单宁含量加多，而经肠谈模拟消化后，由于环境pH值再次发生变化，可能导致部分单宁异构化或降解为α-葡萄糖苷酶扼制智力更差的因素，使样品的酶扼制活性大幅下跌。

4.体外发酵粪便样品的高通量测序服从

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测序质地

飞速抽取FY-CF、FI-CF、FIE-CF、FKI-CF、BK组样品所测得的序列，统计其所代表的操作分类单位（OTU）数目，并以序列数与OTU数目绘图稀释弧线，服从如图4所示，总计样品组的物种数随序列数的加多而加多，当序列数达30 000后，稀释弧线迟缓趋于平坦，诠释本次测序数据量饱和反应肠谈菌群的千般秉性况，饱和体现肠谈菌群中大部分的菌群构成情况。

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菌群千般性及构成因素分析

人文

字据图4中微生物的OTU数目对样品进行 α 千般性分析，如表2所示，各样品的Coverage指数均大于0.999，标明本次测序行动和数据不错反应肠谈菌群的真正构成。FKI-CF、FI-CF和FIE-CF组的Shannon、Simpson、Ace和Chao指数比较于FY-CF组有显赫性各异（ P ＜0.05），诠释未消化的和消化后的覆盆子单宁均会对肠谈菌群的千般性产生影响。FI-CF、FIE-CF和FKI-CF比较较，Simpson指数具有显赫性各异，诠释消化经过中的酶、pH值、消化液会影响覆盆子单宁活性，从而影响肠谈菌群的品貌。

为比较微生物群落之间的各异，本实际进行了 β 千般性分析和主因素分析。由图5可知，FI-CF、FIE-CF、FY-CF、FKI-CF和BK组之间两两分开蕴蓄且各异明显，诠释覆盆子单宁会影响肠谈微生物群的构成结构。

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肠谈菌群结构和组因素析

各样品基于门水平上的物种构成及相对品貌如图6A所示。5 组样品的肠谈菌群均以厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）、放线菌门（Actinobacteriota）和变形菌门（Proteobacteria）为上风菌门，其中BK组上述4 个上风菌门相对品貌区别为47.68%、31.94%、11.16%、8.01%。与BK组比较，覆盆子单宁经模拟消化后Firmicutes相对品貌加多（38.20%），Actinobacteriota、Bacteroidetes和Proteobacteria的相对品貌区别裁减24.44%、63.12%、69.88%，未消化的FY-CF组除Actinobacteriota的相对品貌（15.95%）加多外，其他上风菌门的相对品貌变化趋势与消化后的覆盆子单宁组一致。另外，厚壁菌门中含产丁酸菌，诠释覆盆子单宁可促进丁酸的产生。

各样品基于属水平上的物种构成及相对品貌如图6B所示。在属水平上相对品貌排前15的菌属包括不动杆菌属（Agathobacter）、拟杆菌属（Bacteroides）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）、粪便杆菌属（Faecalibaterium）、布劳特氏菌属（Blautia）、瘤胃球菌属（Ruminococcus）、厌氧原体属（Asteroleplasma）、巨单胞菌属（Megamonas）、Dorea、Alistipes、产气柯林斯菌属（Collinsella）、类杆菌属（Parabacteroides）、Parasutterella和丁酸弧菌（Anaerostipes）。相对品貌前5的Agathobacter、Bifidobacterium、Faecalibaterium、Blautia、Ruminococcus在FY-CF、FI-CF、FIE-CF和FKI-CF组中相对品貌均高于BK组，其中Agathobacter和Faecalibaterium具有显赫性各异（P＜0.05），而Bacteroides相对品貌则显赫低于BK组（P＜0.05）。Faecalibaterium在FY-CF、FI-CF和FIE-CF组中的相对品貌区别较BK组加多1.81%、6.32%和6.45%（图7C）。行为益生菌的Bifidobacterium其相对品貌在单宁样品组中均高于BK组（图7B）。FI-CF、FIE-C和FKI-CF组中Ruminococcus的相对品貌比较BK组加多0.68%、1.21%和3.06%，而在FY-CF组中裁减0.74%（图7D），诠释经过消化后的单宁组分更有助于Ruminococcus增殖，估计可能在消化经过中单宁组分产生新的能被Ruminococcus应用的物资。与BK组比较，Anaerostipes在FY-CF组相对品貌加多2.08%，在FI-CF、FIE-CF组均区别加多0.72%和2.38%（图7A）。此外，咱们还发现单宁富集组分显赫加多了Coprococcus的相对品貌，FY-CF、FI-CF和FIE-CF组中Coprococcus的相对品貌比较BK组区别加多1.24%、0.63%和1.07%（图7E）。以上参谋服从走漏，覆盆子单宁对东谈主体肠谈菌群中成心菌的品貌和千般性均有显赫的促进作用，而比较未消化的覆盆子单宁，消化后的覆盆子单宁对肠谈菌群中成心菌孕育的影响较小，诠释胃肠谈消化经过会影响覆盆子单宁的活性，从而影响其在东谈主体内领略作用。

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5.覆盆子单宁胃肠消化幽静性及肠酵解特点

通过将得回的母离子、离子碎屑的准确分子质地以及它们的特征碎屑时势与参考文件、Scifinder和Metlin数据库中记载的数据进行匹配，对化合物的结构进行粗糙，以母离子的峰面积行为参照暗示不相似品之间单宁代谢物相对含量的变化。覆盆子单宁富集组分（FY）和体外结肠发酵后（FY-CF）两个样品的总离子流图如图8所示，粗糙的化合物信息如表3所示。在FY中检测到了8 种单宁类化合物，其中峰1、8、12、13和18的母离子换取，[M－H] － 为 m / z 633.072 4，具有特征碎屑 m / z 463.044 6（[M－H－170] － ）、 m / z 301.001 7（[MH－332] － ），标明存在没食子酸（ m / z 301）、六羟基联苯二甲酰基（HHDP）和葡萄糖基部分（ m / z 463.044 6），推断为没食子酰基六羟基联苯二甲酰基葡萄糖或其异构体；峰2、14、15、17、22、26和30推断为赤芍素/木麻黄鞣宁异构体，[M－H] － 为 m / z 783.071 6，二级碎屑 m / z 481.056 9为母离子失去1 个HHDP基团所产生，碎屑 m / z 300.998 0为[HHDP－H] － ；峰5、27、32、34和37也具有换取的母离子，[M－H] － 均为 m / z 935.085 4，估计二级碎屑 m / z 633.0823和 m / z 300.996 8为木麻黄鞣宁（C 41 H 28 O 26 ）相等同分异构体；峰7、20和29（ m / z 1 103.092 1、 m / z 1 103.091 1、 m / z 1 018.523 3），均具有特征碎屑 m / z 633.073 7，推断为缩合单宁类化合物；峰4、31和38（ m / z 467.037 1）的母离子换取，具有二级特征碎屑 m / z 300.995 1，推断为鞣花酸繁衍物；推断峰23和25为鞣花酸已糖苷（ m / z 477.0313）；峰28、33和35为鞣花酸戊糖苷（ m / z 433.0415，）；峰36为鞣花酸（ m / z 300.9988）。

鞣花酸的出动旅途为鞣花酸→UroD→UroC→UroB→UroA，UroA为最终代谢居品，在FY-CF中检测到3 种尿石素类化合物，字据张建伟的报谈，同期勾通质谱关总计据，不错推断出峰3、9和16为UroB相等同分异构体（m/z 221.04，C13H8O3）；峰10为UroA（m/z 227.01，C13H8O4）；峰11、19、21和24为UroD相等同分异构体（m/z 259.07，C13H8O6）。

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由于胃肠消化及肠谈微生物对覆盆子单宁构成有显赫影响，如图9、表3所示，覆盆子单宁经胃模拟消化后，FGE组和FG组中的没食子酰基六羟基联苯二甲酰基葡萄糖、赤芍素/木麻黄鞣宁异构体、鞣花单宁及木麻黄鞣宁等8 种单宁类化合物的峰面积较FY组显赫加多，其中，鞣花酸繁衍物、木麻黄鞣宁、鞣花单宁和鞣花酸已糖苷相对含量区别加多45.33%、19.16%、66.28%和53.03%，标明在胃消化经过中，覆盆子中可水解单宁的幽静性受到消化酶和pH值的影响，但消化酶对其影响更小。经肠谈模拟消化后，FIE组和FI组的8 种单宁代谢物的峰面积较FGE、FG两组明显下跌，比较FGE组，FIE中鞣花酸繁衍物、鞣花单宁、鞣花酸戊糖苷以及没食子酰基六羟基联苯二甲酰基葡萄糖的相对含量区别下跌67.48%、55.58%、78.32%和6.84%，可能是由于pH值环境的转变导致部分可水解单宁发生降解。

鞣花单宁在肠谈中被水解为鞣花酸，通纰谬去其中一个内酯和麇集去除羟基，鞣花酸进一步被结肠中的微生物出动成尿石素。通过对比母离子、碎屑离子的准确分子质地相等特征碎屑时势，在FY-CF、FI-CF、FIE-CF样品中发现了尿石素，服从如表3所示。在FY-CF中，不错检测出UroA、UroB、UroC以及UroD，而在FI-CF和FIE-CF中只检测到了UroA和UroB，况且其峰面积下跌显赫，FI-CF、FIE-CF样品中UroA的峰面积区别下跌53.37%和85.36%，而UroC和UroD真是莫得检出。综上，覆盆子单宁经胃肠谈模拟消化后，单宁含量在胃消化阶段会明显加多，肠消化阶段却显赫下跌，标明胃肠谈消化经过会影响覆盆子单宁的幽静性，使其含量显赫裁减。

结 论

通过参谋覆盆子单宁富集组分的体外模拟消化和结肠发酵特点发现，水解单宁含量经胃消化后显赫加多，肠消化后显赫裁减。胃和肠消化后，组分的DPPH摆脱基废除智力邻近，均显赫强于消化前，而ABTS阳离子摆脱基废除智力无显赫各异，胃消化样品的α-葡萄糖苷酶扼制活性为消化前的7.16～7.86 倍，但经过肠消化后活性大大裁减。体外酵解参谋发现，覆盆子单宁可转变肠谈菌群的构成，促进Agathobacter、Bifidobacterium、Faecalibaterium、Blautia、Ruminococcus等潜在肠谈益生菌孕育，而胃肠消化后的覆盆子单宁对肠谈成心菌的孕育也有明显的促进作用。UPLC-ESI-QTOF-MS/MS粗糙发现，经过胃肠消化后，没食子酰基六羟基联苯二甲酰基葡萄糖、木麻黄鞣宁、鞣花酸等单宁类化合物的相对含量均呈先高涨后下跌的趋势，且结肠发酵后尿石素类化合物的出动率较低，仅检测到极少UroA和UroB，而UroC和UroD行为鞣花酸代谢经过的中间体未检测到。本参谋可为进一步构建覆盆子单宁稳态寄递体系，克服单宁自己的低出动率，提高单宁在体内或体外的生物应用率提供表面依据。

本文《 覆盆子单宁富集组分消化幽静性及对肠谈菌群的更始作用 》开端于《食物科学》2023年44卷第9期104-113页，作家： 贾晓燕，胡一又一又，王佩欣，丁 翘，汪恩惠，谢作桦，涂宗财 ，张 露 。 DOI:10.7506/spkx1002-6630-20220618-189 。 点击下方 阅读原文 即可查看著作相 关信息。

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